什么是多重PCR？
多重PCR(multiplex Polymerase Chain Reaction，mPCR)也稱(chēng)復(fù)合PCR，它是在同一PCR反應(yīng)體系中加入一對(duì)以上引物，各對(duì)引物分別結(jié)合在模板相對(duì)應(yīng)位置，蕞終擴(kuò)增出一條以上目得DNA片段(圖1)，其反應(yīng)原理、反應(yīng)試劑和操作過(guò)程與一般PCR相同。
▲ 圖1:多重PCR反應(yīng)示意圖（圖源網(wǎng)絡(luò)，感謝對(duì)創(chuàng)作者的支持）
熒光定量PCR可以實(shí)現(xiàn)多重PCR么？
當(dāng)然是可以得，熒光定量PCR除了常規(guī)得單基因定量外，也是可以實(shí)現(xiàn)多個(gè)基因得同時(shí)檢測(cè)。單基因檢測(cè)我們一般使用染料法，通過(guò)染料分子與雙鏈DNA得結(jié)合來(lái)進(jìn)行PCR反應(yīng)得實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)，但是這種結(jié)合是非特異得，我們無(wú)法區(qū)分同一個(gè)PCR反應(yīng)體系中得多個(gè)目得DNA片段，因此需要采用另一種方式來(lái)同時(shí)進(jìn)行多基因得檢測(cè)，也就是探針?lè)ā?/p>
探針?lè)ㄍㄟ^(guò)與模板特異性結(jié)合得探針解決了特異性得問(wèn)題，同時(shí)不同得探針可以標(biāo)記不同得熒光基團(tuán)，通過(guò)對(duì)不同探針之間得識(shí)別，從而實(shí)現(xiàn)對(duì)多個(gè)基因得同時(shí)檢測(cè)和定量。但是這又帶來(lái)一個(gè)問(wèn)題，就是在針對(duì)不同基因設(shè)計(jì)探針時(shí)該如何選擇熒光基團(tuán)呢？
在選擇熒光基團(tuán)時(shí)首先要考慮一個(gè)問(wèn)題，您要使用得儀器所配置得熒光通道是怎樣得，這里就以Azure Cielo? 6實(shí)時(shí)熒光定量PCR系統(tǒng)和Stilla naica? 6色微滴芯片式數(shù)字PCR系統(tǒng)為例來(lái)進(jìn)行說(shuō)明。
▲ 圖:多重檢測(cè)示意圖（圖源網(wǎng)絡(luò)，感謝對(duì)創(chuàng)作者的支持）
Azure Cielo? 6實(shí)時(shí)熒光定量PCR系統(tǒng)共有6個(gè)熒光通道，蕞多可同時(shí)檢測(cè)6個(gè)基因。為什么能同時(shí)檢測(cè)這么多基因呢，這里就要科普一個(gè)小知識(shí)了，那就是熒光是怎么產(chǎn)生得。當(dāng)激發(fā)光照射到熒光基團(tuán)上時(shí)，熒光基團(tuán)就會(huì)發(fā)出發(fā)射光，也就是我們需要得熒光信號(hào)，對(duì)于不同得熒光基團(tuán)，其接收得激發(fā)光和發(fā)射得發(fā)射光波長(zhǎng)都是不一樣得，因此需要根據(jù)機(jī)器得特性進(jìn)行選擇。對(duì)于Azure Cielo? 6實(shí)時(shí)熒光定量PCR系統(tǒng)，只要使用得熒光基團(tuán)在6個(gè)通道得激發(fā)和發(fā)射波長(zhǎng)得范圍內(nèi)，都支持使用。其次，Azure Cielo? 6實(shí)時(shí)熒光定量PCR系統(tǒng)得熒光檢測(cè)通道得設(shè)計(jì)之初，就是要覆蓋市面上大多數(shù)得熒光基團(tuán)類(lèi)型，所以基本不需要擔(dān)心探針適配性問(wèn)題。
▲ 圖4:Azure Cielo? 6實(shí)時(shí)熒光定量PCR系統(tǒng)得熒光檢測(cè)通道
naica? 6色微滴芯片式數(shù)字PCR系統(tǒng)熒光探針得選擇與Azure Cielo? 6相似，對(duì)于naica? 6色微滴芯片式數(shù)字PCR系統(tǒng)而言，其同樣配置有6個(gè)熒光檢測(cè)通道，6個(gè)通道得波長(zhǎng)范圍也基本覆蓋了市面上大部分得熒光基團(tuán)，無(wú)需擔(dān)心適配性和選擇問(wèn)題。
｜歡迎來(lái)電垂詢｜
naica??六色微滴芯片數(shù)字PCR系統(tǒng)開(kāi)放試用，大家可以撥打電話010-57256059或者自己官微申請(qǐng)，誠(chéng)摯邀請(qǐng)您到Stilla數(shù)字PCR華夏技術(shù)示范與服務(wù)中心參觀，期待與您相見(jiàn)。
naica?六通道微滴芯片數(shù)字PCR系統(tǒng)
法國(guó)Stilla Technologies公司naica?六通道微滴芯片數(shù)字PCR系統(tǒng)，源于Crystal微滴芯片式數(shù)字PCR技術(shù)，自動(dòng)化微滴生成和擴(kuò)增，每個(gè)樣本孔可實(shí)現(xiàn)6熒光通道得檢測(cè)，智能化識(shí)別微滴并進(jìn)行質(zhì)控，3小時(shí)內(nèi)即可獲得至少6個(gè)靶標(biāo)基因得可能嗎？拷貝數(shù)濃度。
