尿素結合緩沖溶液
8M 尿素
20mM 咪唑
500mM NaCI
1mM 2-巰基乙醇
20mM Tris-HCI
復性緩沖溶液20mM 咪唑
500mM NaCI
1mM 2-巰基乙醇
20mM Tris-HCI
Tris洗脫緩沖溶液
500mM 咪唑
500mM NaCI
1mM 2-巰基乙醇
20mM Tris-HCI
實驗方案：1、用低流速將樣品結合在Ni柱上。
2、用10倍柱體積得尿素結合緩沖液洗柱。
3、以百分百得尿素結合緩沖溶液到百分百復性緩沖溶液得線性梯度經60min以0.5ml/min速度流過柱子。
4、以百分百得復性緩沖溶液到百分百Tris洗脫緩沖液得線性梯度流經柱子。
5、蛋白純度檢測：SDS-PAGE。
備注：1、尿素緩沖溶液得配制：稱取尿素，加入2M 咪唑、1M Tris-HCI（pH 8.0）和水至90%終體積。加熱容器（因變性劑會溶解吸熱致冷），用45度水浴加熱至室溫并攪拌溶解。調節(jié)PH，加水至終體積。用前立即加入2-巰基乙醇。
2、含有鹽酸胍得樣品不能直接使用SDS-PAGE檢測，因為SDS會使鹽酸胍沉淀。含有尿素得樣品不需要除掉尿素就可以直接用SDS-PAGE進行分析。
參考文獻：《蛋白質組學中得蛋白質純化手冊》
金斯瑞春季填料大促銷，低至5折?；顒釉斍轫摚禾貏egenscript/spring-promotions-product.html
